Buenos días, Queremos compartirles algunas cuestiones que aprendimos en el taller que organizó BD en IUCBC el martes pasado y que podrían resultar de interés para el diseño de sus experimentos de citometría de flujo: 1) Los fijadores a base de metanol disminuyen la fluorescencia de PE y sus tandems. 2) Las cianinas tienden a unirse inespecíficamente a células presentadoras de antígeno, en particular linfocitos B y macrófagos. Esto puede generar una señal de fondo elevada y dificultar la discriminación entre células positivas y negativas al usar anticuerpos conjugados con tandems que contienen cianina. 3) Con respecto al diseño de paneles nos comentaron lo siguiente: En el siguiente link encontrarán un folleto con información de utilidad para poder combinar de la mejor manera posible marcadores y fluorocromos en base a sus niveles de expresión e intensidad de fluorescencia respectivamente: https://www.bdbiosciences.com/content/dam/bdb/marketing-documents/products-p... En el caso de necesitar usar fluorocromos de alto spillover se pueden emplear algunas estrategias para minimizar dicho efecto y mejorar la calidad de la tinción final: -Combinarlo con un marcador de exclusión. -Usarlo en marcadores de baja expresión. -Emplearlo para marcadores que se encuentren lo más al final posible de la estrategia de gating. 4) Mostraron experimentos usando la técnica de “Barcoding” que permite reducir significativamente el uso de anticuerpos y el tiempo de adquisición en el citómetro. Consiste en teñir cada muestra con diferentes diluciones de colorantes (como CFSE), antes de realizar la tinción con anticuerpos. Luego, las muestras se combinan en un solo tubo y se tiñen juntas con el mismo cóctel de anticuerpos. En el análisis, se pueden distinguir las muestras por la intensidad del colorante. Esta estrategia también ayuda a minimizar variaciones por errores de pipeteo entre muestras. Pueden leer el siguiente paper para más información sobre esta técnica: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S266616672030054X Esperamos que esto les sea de utilidad y quedamos disponibles para quienes quieran discutir con nosotros sobre alguno de estos aspectos. Saludos.